Е.И. Антонова1, А.Б. Ачилов2, Н.А. Ленгесова3, Н.В. Фирсова4, Е.В. Балацюк5, Д.А. Сайфутдинова6

1–6 Научно-исследовательский центр фундаментальных и прикладных проблем биоэкологии и биотехнологии ФГБОУ ВО Ульяновский государственный педагогический университет им. И.Н. Ульянова (г. Ульяновск, Россия)

1 antonov_67@mail.ru, 2 a.achilow@inbox.ru, 3 lengesova@yandex.ru, 4 n-firsova@mail.ru, 5 balacyxa@mail.ru, 6 dinasajfutdinova17@gmail.com

Постановка проблемы. Гистопатологическое исследование представляет собой золотой стандарт диагностики меланоцитарных поражений кожи, но патологи, оценивающие одно и то же поражение, могут не соглашаться друг с другом относительно диагноза. Мультиплексные методы детекции мутаций генов с использованием технологии xMAP позволяют получить результат в короткие сроки, одномоментно несколько анализируемых веществ в одном аналите, и позволит выявить предрасположенность развития диспластических невусов в меланому, что крайне актуально с позиции успешной терапии.

Цель работы – отработка мультиплексного отечественного протокола xMAP-ASPE-xTAG определения мутаций генов BRAF, MITF-М, CDKN2A на примере образований кожи с первичным гистологическим заключением «диспластический невус с пигментным компонентом», для оценки вероятности его трансформации в меланому.

Результаты. Разработан отечественный протокол мультиплексной тест-системы на основе технологии xMAP-ASPE-xTAG для одномоментной детекции мутаций генов в одном аналите, таких как BRAF (rs113488022; p.V600E; c.1799T>A), MITF-М (rs149617956; p.E318K; c.952G>A) и CDKN2А (rs121913386, p.P114L, c.341C>T; rs121913387, p.R58*, c.172C>T; rs121913388, p.R80*, c.238C>T; rs121913389, p.W110*, c.330G>A; rs1057519852, p.W110*, c.329G>A). По результатам определены параметры протокола согласно площади образования, общей и целевой анализируемой концентрации ДНК, оптимальной концентрации реагентов, количества микросфер, что позволило стандартизировать и оптимизировать условия проведения исследований, достичь приемлемой чувствительности и надежной производительности тест-системы. В 3-х из 4-х образцах выявлена мутация BRAF. В одном образце определены мутации трех генов – BRAF, MITF-М, CDKN2А, наличие которых отражает начальный этап неоплазии, наследственную предрасположенность к развитию меланомы, нарушение регуляции клеточного цикла и пролиферации. Выявленная мутация зародышевой линии определяет высокий риск трансформации в меланому.

Практическая значимость. Работа проводится в рамках разработки отечественной диагностической тест-системы с использованием технологии xMAP-ASPE-xTAG с целью ранней диагностики и выявления предрасположенности к развитию меланомы.

Антонова Е.И., Ачилов А.Б., Ленгесова Н.А., Фирсова Н.В., Балацюк Е.В., Сайфутдинова Д.А. Молекулярное профилирование меланоцитом (диспластический невус с пигментным компонентом) // Технологии живых систем. 2025. T. 22. № 4. С. 32-41. DOI: https://doi.org/10.18127/j20700997-202504-04

1. Andea A.A. Molecular testing for melanocytic tumors: a practical update // Histopathology. 2022. V. 80. P. 150–165.
2. Spaccarelli N., Drozdowski R., Peters M.S., Grant-Kels J.M. Dysplastic nevus part II: Molecular/genetic profiles and management // Journal of the American Academy of Dermatology. 2023. V. 88. Is. 1. P. 13–20.
3. Kucharski D., Kleczek P., Jaworek-Korjakowska J., Dyduch G., Gorgon M. Semi-supervised nests of melanocytes segmentation method using convolutional autoencoders // Sensors. 2020. V. 20. P. 1546. DOI: 10.3390/s20061546
4. Xavier-Junior J.C.C., Ocanha-Xavier J.P. Dysplastic melanocytic nevus: Are molecular findings the key to the diagnosis? // Annals of Diagnostic Pathology. 2022. V. 60. P. 152006.
5. Wei-Wen S., Chung-Hsing C. Nevi, dysplastic nevi, and melanoma. Molecular and immune mechanisms involving the progression // Tzu Chi Medical Journal. 2022. V. 34. (1). P. 1–7.
6. Frischhut N., Zelger B., Andre F., Zelger B.G. The spectrum of melanocytic nevi and their clinical implications // Journal der Deutschen Dermatologischen Gesellschaft. 2022. V. 20. Is. 4. Р. 483–504.
7. Lorbeer F.K., Rieser G., Goel A. et al. Distinct senescence mechanisms restrain progression of dysplastic nevi // bioRxiv. 2023. V. 14.
   P. 548818. DOI: 10.1101/2023.07.14.548818
8. Elder D.E., Duncan L.M., Elenitsas R., et al. Dysplastic naevus” // WHO Classification of Skin Tumours. 2023. V. 12. 5th ed. Lyon (France): International Agency for Research on Cancer.
9. Shea C.R., Prieto V.G., Shachaf C.M., Florell S.R. Grading melanocytic dysplasia: updated histopathologic criteria // Journal of Cutaneous Pathology. 2024. P. 1–9. DOI: 10.1111/cup.14744
10. Prkaˇcin I., Šamija I., Filipovi´c N. et al. Frequency of BRAF mutations in dysplastic nevi, lentigo maligna, and melanoma In Situ // J. Clin. Med. 2024. V. 13. P. 4799. DOI: 10.3390/ jcm13164799
11. Schneckenreither G., Tschandl P., Rippinger C. et al. Reproduction of patterns in melanocytic proliferations by agent-based simulation and geometric modeling // PLoS Comput Biol. 2021. V. 17(2). P. e1008660. DOI: 10.1371/journal. pcbi.1008660
12. Chun-On P., Hinchie A.M., Beale H.C. et al. TPP1 promoter mutations cooperate with TERT promoter mutations to lengthen telomeres in melanoma // Science. 2022. V. 378. P. 664–668.
13. Антонова Е.И., Фирсова Н.В., Ачилов А.Б. и др. Разработка xmap-протокола ASPE детекции мутаций генов в образцах диспластического невуса кожи // Научный медицинский вестник Югры. 2025. Т. 43. № 1. С. 16–22.
14. Toussi A., Mans N., Welborn J., Kiuru M. Germline mutations predisposing to melanoma // J. Cutan. Pathol. 2020. V. 47. P. 606–616.
15. Dilshat R., Fock V., Kenny C. et al. MITF reprograms the extracellular matrix and focal adhesion in melanoma // Cancer BiologyGenetics and Genomics. eLife. 2021. V. 10. P. e63093. DOI: 10.7554/eLife.63093
16. Gelmi M.C., Houtzagers L.E., Strub T. et al. MITF in normal melanocytes, cutaneous and uveal melanoma: a delicate balance // Int. J. Mol. Sci. 2022. V. 23. P. 6001. DOI: 10.3390/ijms23116001
17. Guhan S.M., Artomov M., McCormick S. et al. Cancer risks associated with the germline MITF(E318K) variant // Scientific Reports. 2020. V. 10(1). P. 17051.
18. Karczewski K.J., Francioli L.C., Tiao G. et al. The mutational constraint spectrum quantified from variation in 141,456 humans // Nature. 2020. V. 581(7809). P. 434–443.
19. Vu H.N., Dilshat R., Fock V., Steingrímsson E. User guide to MiT-TFE isoforms and post-translational modifications // Pigment Cell Melanoma Res. 2021. V. 34. P. 13–27.
20. Wallingford C.K., Maas E.J., Howard A. et al. MITF E318K: A rare homozygous case with multiple primary melanoma // Pigment Cell Melanoma Res. 2024. V. 37. P. 68–73.
21. Ciccarese G., Dalmasso B., Bruno W. et al. Clinical, pathological and dermoscopic phenotype of MITF p. E318K carrier cutaneous melanoma patients // J. Transl. Med. 2020. V. 18 (1). P. 78.
22. Aebischer V., Abu-Ghazaleh A., Metzler G. et al. Histopathologic abundance of pigmentation correlates with disease-specific survival in malignant melanoma but is not independent of current AJCC pT stage // Pigment Cell Melanoma Res. 2023. V. 36. P. 512–521.
23. Cabaço L.C., Tomás A., Pojo M., Barral D. C. The dark side of melanin secretion in cutaneous melanoma aggressiveness // Frontiers in Oncology. 2022. V. 12. Article 887366. DOI: 10.3389/fonc.2022.887366
24. Derrien A.-C., Rodrigues M., Eeckhoutte A. et al. Germline MBD4 Mutations and Predisposition to Uveal Melanoma // J. Natl. Cancer Inst. 2020. V. 113. P. 80–87.
25. Чалый М.Е., Охоботов Д.А. Афанасьевская Е.В. и др. Роль тканевого резонансного взаимодействия в выявлении онкологических заболеваний // Технологии живых систем. 2022. Т. 19. № 1. С. 5–13.