Д.И. Бреславец1, Ю.В. Абаленихина2, А.В. Щулькин3, С.Г. Буйлина4, А.В. Золотова5, Е.Н. Якушева6

1–6 ФГБОУ ВО Рязанский государственный медицинский университет им. академика И.П. Павлова Минздрава России (г. Рязань, Россия)

1 dmitrij.breslavets@yandex.ru, 2 abalenihina88@mail.ru, 3 alekseyshulkin@rambler.ru, 4 buylina.sofiya2010@mail.ru, 5 alevtinazolotowa@yandex.ru, 6 e.yakusheva@rzgmu.ru

Постановка проблемы. В настоящее время, при разработке интраназальных систем доставки лекарственных средств для локального/системного эффекта необходимо оценить их цитотоксичность и транспорт веществ через носовой эпителий, для чего в экспериментах in vitro активно используется клеточная линия RPMI 2650.

Цель работы – оценка формирования клеточного монослоя по содержанию белков межклеточных контактов ZO-1, окклюдина, клаудина-1, E-кадгерина клеточной линии RPMI 2650 в динамике культивирования с 1- по 8-й день.

Результаты. Исследование элементов RPMI 2650 с помощью световой микроскопии показало, что к 5-му дню инкубирования клетки образуют монослой, который уплотняется к 8-му дню наблюдения. При этом клетки формировали плотные межклеточные контакты, о чем свидетельствует динамика увеличения относительного количества белков ZO-1, окклюдина, клаудина-1,
E-кадгерина.

Практическая значимость. Клетки линии RPMI 2650, культивируемые в питательной среде MEM с добавлением 10% FBS, 2 мМ L-глутамина, 100 Ед/мл пенициллина и 100 мг/мл стрептомицина, образуют монослой на 5-й день культивирования, который уплотняется к 8-му дню наблюдения. Образование монослоя сопровождается повышением относительного количества белков межклеточных контактов ZO-1, Е-кадгерина, клаудина-1, окклюдина на 5- и 8-й дни культивирования, что позволяет использовать данную клеточную линию для изучения транспорта экзогенных веществ in vitro.

Бреславец Д.И., Абаленихина Ю.В., Щулькин А.В., Буйлина С.Г., Золотова А.В., Якушева Е.Н. Относительное количество белков межклеточных контактов в динамике формирования монослоя клеток линии RPMI2650 // Технологии живых систем. 2025. T. 22. № 2. С. 58-65. DOI: https://doi.org/10.18127/j20700997-202502-06

1. Moore G.E., Sandberg A.A. Studies of a human tumor cell line with a diploid karyotype // Cancer. 1964. V. 17. P. 170–175. DOI:10.1002/1097-0142(196402)17:2<170::aid-cncr2820170206>3.0.co;2-n
2. Wengst A., Reichl S. RPMI 2650 epithelial model and three-dimensional reconstructed human nasal mucosa as in vitro models for nasal permeation studies // Eur. J. Pharm. Biopharm. 2010. V. 74. Epub 2009. DOI:10.1016/j.ejpb.2009.08.008
3. Kim K.A., Jung J.H., Choi Y.S., Kim S.T. Wogonin inhibits tight junction disruption via suppression of inflammatory response and phosphorylation of AKT/NF-κB and ERK1/2 in rhinovirus-infected human nasal epithelial cells // Inflamm Res. 2022. V. 71. P. 357–368. DOI: 10.1007/s00011-022-01542-w
4. Тихонова Г.А., Котов О.В., Маркин А.А. Биомаркеры как инструмент медико-биологического мониторинга и контроля (Обзор литературы. Часть 1) // Технологии живых систем. 2023. Т. 20. № 2. С. 18–26. DOI: 10.18127/j20700997-202302-02
5. Mercier C., Perek N., Delavenne X. Is RPMI 2650 a Suitable In Vitro Nasal Model for Drug Transport Studies? // Eur. J. Drug Metab. Pharmacokinet. 2018. V. 43. P. 13–24. DOI: 10.1007/s13318-017-0426-x
6. Siti Sarah C.O., Nur Husna S.M., Md Shukri N. et al. Zonula occludens-1 expression is reduced in nasal epithelial cells of allergic rhinitis patients // PeerJ.  2022. V. 22. e13314. doi: 10.7717/peerj.13314
7. Stevenson B.R., Siliciano J.D., Mooseker M.S., Goodenough D.A. Identification of zo-1: A high molecular weight polypeptide associated with the tight junction (zonula occludens) in a variety of epithelia // J. Cell Biol. 1986. V. 103. P. 755–766. DOI: 10.1083/jcb.103.3.755
8. Kuo W.T., Odenwald M.A., Turner J.R., Zuo L. Tight junction proteins occludin and ZO-1 as regulators of epithelial proliferation and survival // Ann. N Y Acad. Sci. 2022. V. 1514. P. 21–33. DOI: 10.1111/nyas.14798
9. Tsukita S., Tanaka H., Tamura A. The Claudins: From Tight Junctions to Biological Systems // Trends Biochem. Sci. 2019. V. 2. Р. 141–152. DOI: 10.1016/j.tibs.2018.09.008
10. Furuse M., Hirase T., Itoh M. et al. Occludin: A novel integral membrane protein localizing at tight junctions // J. Cell Biol. 1993. V. 123. P. 1777–1788. doi: 10.1083/jcb.123.6.1777
11. Kitajiri S., Katsuno T., Sasaki H. et al. Deafness in occludin-deficient mice with dislocation of tricellulin and progressive apoptosis of the hair cells // Biology open. 2014. V. 3. P. 759–766.
12. Данилова Н.В., Олейникова Н.А. E-кадгерин: строение и функции, роль в канцерогенезе рака желудка // Архив патологии. 2023. Т. 85. № 4. С. 70–77. DOI: 10.17116/patol20238504170
13. Haas A.J., Zihni C., Krug S.M. et al. ZO-1 Guides Tight Junction Assembly and Epithelial Morphogenesis via Cytoskeletal Tension-Dependent and -Independent Functions // Cells. 2022. V. 11. P. 3775. doi: 10.3390/cells11233775