В.М. Попова1, А.А. Хаконов2, И.Н. Матвеева3, В.Т. Ночевный4, Б.Л. Манин5

1–3 ФГБНУ «Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт
биологической промышленности» (ФГБНУ «ВНИТИБП») (Моск. обл., г.о. Лосино-Петровский, Россия)

4 ФГБУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств
для животных и кормов» (ФГБУ «ВГНКИ») (Москва, Россия)

5 ФГБУ «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ») (г. Владимир, Россия)

Постановка проблемы. Успех производства и контроля качества иммунобиологических препаратов состоит в поиске и паспортизации наиболее перспективных клеточных субстратов, их доступности и стабильности биологических свойств, высокой чувствительности и отсутствии контаминации, а также технологичности изготовления и контроля качества тест-культур. Необходимы совершенствование и разработка современных технологических процессов производства культуральных моделей, отвечающих требованиям GMP для изготовления противовирусных препаратов. Важное место занимают вопросы эффективного контроля питательных сред и сыворотки крови животных, селекции и отбора наиболее продуктивных клеточных моделей, а также применения наиболее эффективных лабораторных и промышленных методов культивирования вирусов.

Цель работы – разработка современных технологических процессов производства вируссодержащих материалов; изыскание новых средств, методов контроля и получения качественных культур клеток и активных антигенов в промышленных объемах.

Результаты. Многолетние исследования по проблеме оптимизации производства клеточных культур позволили определить вопросы сравнительной оценки ростовых свойств коммерческих серий питательных сред и сывороток крови животных; их контаминации вирусами, грибами и микоплазмами. Апробированы антибактериальные и антигрибковые препараты с широким спектром действия, а также альтернативный метод дезагрегации тканей диспергентом на основе тринатрий цитрата (ТНЦ). Разработаны способы получения и деконтаминации сывороток крови животных при помощи лантаноидов.

Практическая значимость. Практическое применение разработанных правил, требований изготовления, контроля культуральных моделей и исходных материалов позволяют существенно расширить возможности для стандартизации производства, повышения активности конечного продукта, а также повысить экономичность и эффективность производства противовирусных препаратов.

Попова В.М., Хаконов А.А., Матвеева И.Н., Ночевный В.Т., Манин Б.Л. Совершенствование и стандартизация технологических процессов производства клеточных культур // Технологии живых систем. 2022. T. 19. № 3. С. 63-72. DOI: https://doi.org/ 10.18127/j20700997-202203-07

1. Животная клетка в культуре (Методы и применение в биотехнологии.) / Под ред. Л.П. Дьяконова, В.И. Ситкова. М.: Спутник. 2000. 400 с.
2. Ночевный В.Т., Колышкин В.М., Попов В.Ф. Перспективы использования метода проточной цитометрии для стандартизации перевиваемых линий клеток // Материалы междунар. научн. конф. Владимир. 2003. С. 498–500.
3. Авторское свидетельство № 1067940, кл. С-12 № 9/64, 1984. Способ получения трипсина / В.Т. Ночевный, Д.Ф. Осидзе, А.И. Гуславский, Н.А. Башашкина, А.Г. Почтаренко, Г.Е. Диварова, Ю.П. Чернецкий, Е.Э. Школьников, В.Н. Качалов.
4. Авторское свидетельство № 1628526, SU 162852 A1 1990 г. Способ получения трипсина / В.Т. Ночевный, В.Ф. Осидзе, А.И. Гуславский
5. Патент № 2403285 С (RU), 10.11. 2010. Опубликовано 10.11. 2010. Бюл. № 31. C. 743. Заявка № 2009121160/10 от 04.06.2009. Способ получения трипсина / В.М. Попова, А.Я. Самуйленко, А.И. Гуславский, И.Л. Беро, Е.Э. Школьников, А.А. Нежута, В.И. Еремец, В.А. Лукина, Т.А. Скотникова, Л.А. Скороходова, Н.К. Еремец, И.И. Кочиш.
6. Патент № 2437936 CI (RU), 27.12.2011. Бюл. № 36 Заявка № 2010124270/10 от 17.06.2010. Способ иммобилизации трипсина / В.М. Попова, В.А. Лукина, Е.И. Ярыгина, Л.А. Скороходова, А.И. Гуславский, А.Я. Самуйленко, И.И. Кочиш, И.Н. Матвеева, В.И. Еремец, С.А. Гринь, А.А. Раевский, И.Л. Беро, М.А. Фролова, Н.К. Еремец.
7. Патент 2142503 (РФ) 6.С.12 № 1/00.05/02. ГНЦВ и Б «Вектор» Заявл. 01.07.97, опубл. 10.12.99., Бюл. 34. Способ получения стерильного раствора трипсина для культивирования клеток / М.П. Багрянцева, Г.П. Трошкова, Л.П. Камший, Л.Д. Мартынец, А.В. Величко, В.Т. Ночевный.
8. Ночевный В.Т., Виолин Б.В., Карпухина О.Г. Энрофлон-К – эффективное средство профилактики микоплазменной и бактериальной инфекции // Аграрная наука. 2003. № 6. С 13–16.
9. Патент № 1365412 (РФ). Препарат для предотвращения бактериальной контаминации культур тканей / В.Т. Ночевный, Д.Ф. Осидзе, В.Ф. Ковалев.
10. Петручук Е.М., Ночевный В.Т., Николаева М.А. Перевиваемая линия клеток MDBK – культуральная модель для контроля сыворотки крови на контаминанты // Вестник с-х науки. 1989. № 3. С. 72–77.
11. Безгин В.М., Букова Н.К., Козлов В.Е. и др. Основы промышленной биотехнологии. Курск: Изд. КГСХА. 2011. 512 с.
12. Колокольцева Т.Д., Сабурина И.Н. Патологические аспекты микоплазменной контаминации клеточных культур // Патогенез. 2013. Т. 11. № 3. С. 29–31.
13. Патент № 2460786 (КГ) МПКС12N5/07. Способ получения сыворотки крови взрослого крупного скота для культивирования клеток животных и человека / А.В. Иванов, Э.М. Плотникова, Н.И. Гурьянов и др. Заявл. 19.04.2011 опубл. 10.09.2012.
14. Пономарев А.П., Подколзин И.В., Амелин В.Г. Макро,- микро- и ультрамикроэлементы в экстрактах из природного нанотехнологического минерала – шунгита // Нанотехнологии и охрана здоровья. 2012. Т. IV. № 2. C. 48–55.
15. Патент № 2664729 (РФ), МПК G01N 33/49/ Способ очистки сыворотки крови крупного рогатого скота от контаминирующих агентов / А.П. Пономарев, Е.В. Белик, Б.Л. Манин, М.М. Коган заяв. 23.05.17; опубл. 22.08.18, Бюл. № 24.
16. Пономарев А.П. Культивирование клеточных линий человека и животных с использованием сыворотки крови, очищенной лантаноидами. Владимир: Влад. гос. ун-т. 2019. С. 152–167.
17. Федотов А.Е. Основы GMP. М.: АСИНКОМ. 2012. 576 с.
18. Авторское свидетельство 959422
19. Ночевный В.Т., Габелко А.Ф. Количественный метод биологического контроля питательных сред и сыворотки крови животных // Вестник с.х. наук. 1992. № 2. С. 142–148.
20. Самуйленко А.Я., Рубан Е.А. Основы технологии производства ветеринарных биологических препаратов. М.: РАСХН. 2000. 781 с.
21. Ласковый В.Н., Ночевный В.Т., Виолин Б.В. Формальдегид: метаболизм, антибактериальные, терапевтические и иммуномодулирующие свойства // Аграрная наука. 2005. № 10. С. 21–25.
22. Иммунокоррекция в клинической ветеринарной медицине / Под ред. П.А. Красочко Минск: Техноперспектива. 2008. 507 с.
23. Глотов А.Г., Шкилев Н.А., Сергеев А.Н. Вирусные и ассоциативные болезни крупного рогатого скота (Особенности эпизоотологии, патогенеза, клинического проявления, патологических изменений) // Ветеринарный консультант. 2005. № 9. С. 5–14.