Новый метод тестирования активности ферментов репарации, рестрикции и модификации с помощью олигонуклеотидов, иммобилизованных на полимерном носителе

Предложен быстрый и универсальный метод качественного тестирования активности ферментов репарации, рестрикции и модификации. Метод основан на ферментативном гидролизе олигодезоксирибонуклеотидов или ДНК-дуплексов, непосредственно иммобилизованных на полимерном носителе. Иммобилизованные субстраты содержат радиоактивную (32Р) или флуоресцентную (родамин В или флуоресцеин) метку. В результате ферментативной реакции меченые продукты с полимерного носителя переходят в раствор. Активность ферментов оцениваются как соотношение количества меченых продуктов в растворе к общему количеству иммобилизованного меченого субстрата. Возможности метода продемонстрированы на примере оценки активности фермента репарации урацил-ДНК-гликозилазы, эндонуклеаз рестрикции SsoII, Bst2UI, MvaI, EcoRII, MspR9I и (цитозин-5)-ДНК-метилтрансферазы SsoII. Он особенно удобен в случаях, когда необходимо быстро оценить активность данных ферментов, например, при их выделении и очистке.